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filariasis

Estado de Disponibilidad:

Dispositivo de prueba rápida de filariasis IgG/IgM

Insertar paquete

Especímenes: Sangre Total/Suero/Plasma

Fecha de vigencia: 2015-02

Solo para uso profesional de diagnóstico in vitro.


USO PREVISTO

La prueba rápida Filariasis IgG/IgM es un inmunoensayo de flujo lateral para la detección y diferenciación simultáneas de parásitos filariales antilinfáticos IgG e IgM (W. Bancrofti y B. Malayi) en suero, plasma o sangre total humanos.Esta prueba está destinada a ser utilizada como prueba de detección y como ayuda en

el  diagnóstico de infección por parásitos filariales linfáticos.Cualquier muestra reactiva con la prueba rápida de filariasis IgG/IgM debe confirmarse con métodos de prueba alternativos.


La filariasis linfática conocida como Elefantiasis, causada principalmente por W. bancrofti y B. malayi, afecta a unos 120 millones de personas en 80 países1,2.La enfermedad se transmite a los humanos por la picadura de mosquitos infectados dentro de los cuales se desarrollan las microflarias succionadas de un sujeto humano infectado.

en larvas de tercer estadio.En general, se requiere una exposición repetida y prolongada a las larvas infectadas para que se establezca la infección humana.

El diagnóstico parasitológico definitivo es la demostración de microflarias en muestras de sangre3.Sin embargo, esta prueba estándar de oro está restringida por el requisito de recolección de sangre nocturna y

falta  de sensibilidad adecuada.La detección de antígenos circulantes está disponible comercialmente.Su utilidad es limitada para W. bancrofti4.Además, la microfilaremia y la antigenemia se desarrollan de meses a años después de la exposición.

La detección de anticuerpos proporciona un medio temprano para detectar la infección por parásitos filariales.La presencia de IgM a los antígenos del parásito sugiere una infección actual, mientras que la IgG corresponde a una etapa tardía de la infección o una infección pasada5.Además, la identificación de antígenos conservados permite aplicar la prueba de 'pan-filaria'.La utilización de proteínas recombinantes elimina la reacción cruzada con individuos que tienen

otras enfermedades parasitarias6.La prueba rápida de filariasis IgG/IgM utiliza antígenos recombinantes conservados para detectar simultáneamente IgG  e IgM a los parásitos W. bancrofti y B. malayi sin la restricción en la recolección de muestras.


La prueba rápida Filariasis IgG/IgM es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral.El casete de prueba consta de: 1) una almohadilla de conjugado de color burdeos que contiene antígenos comunes recombinantes de W. bancrofti y B. malayi conjugados con oro coloidal (conjugados de filariasis) y conjugados de IgG‐oro de conejo, 2) una tira de membrana de nitrocelulosa que contiene dos bandas de prueba ( bandas T1 y T2) y una banda de control (C  banda).La banda T1 está precubierta con IgM anti‐humano monoclonal para la detección de  IgM anti-W. bancrofti y B. malayi, la banda T2 está pre-recubierta con reactivos para la detección de IgG anti-W. bancrofti y B. malayi, y la banda C está pre-recubierta con IgG de cabra anti-conejo.

Cuando se dispensa un volumen adecuado de muestra de prueba en el pozo de muestra del casete, la muestra migra por acción capilar a través del casete.Los anticuerpos IgM contra W. bancrofti o B. malayi, si están presentes en la muestra, se unirán a los conjugados de Filariasis.El inmunocomplejo es  luego capturado en la membrana por el anticuerpo IgM anti‐humano recubierto previamente, formando una banda T2 de color burdeos, lo que indica un resultado positivo de la prueba de IgM para W. bancrofti o B. malayi.

Los anticuerpos IgG contra W. bancrofti o B. malayi, si están presentes en la muestra, se unirán a los conjugados de Filariasis.El inmunocomplejo luego es capturado por los reactivos recubiertos previamente en la membrana, formando una banda T1 de color burdeos, lo que indica un resultado positivo de la prueba de IgG para W. bancrofti o B. malayi.Ausencia  de cualquier banda de prueba (T1 y T2) sugiere un resultado negativo.La prueba contiene un control interno (banda C) que debe exhibir una banda de color burdeos del inmunocomplejo de cabra anti conejo IgG/conejo IgG-oro conjugado independientemente del desarrollo de color en cualquiera de las bandas de prueba.De lo contrario, el resultado de la prueba no es válido y la muestra debe volver a analizarse con otro dispositivo.


Cada dispositivo contiene una tira con conjugados de colores.

Dispositivos de prueba empaquetados individualmente y reactivos preesparcidos en el

regiones correspondientes

Pipetas desechables  Para añadir especímenes utilice

Buffer   Solución salina tamponada con fosfato y conservante

Insertar paquete  Para instrucciones de operación


ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Almacenar como está empaquetado en la bolsa sellada, ya sea a temperatura ambiente o refrigerado (2‐30°C).El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de vencimiento impresa en la bolsa sellada.El dispositivo de prueba debe permanecer en la bolsa sellada hasta su uso.No congelar.No lo use más allá de la fecha de vencimiento.


Materiales proporcionados

Dispositivos de prueba

Buffer

Materiales requeridos pero no provistos

Contenedores de recogida de muestras

Centrífugo

Cuentagotas

 Insertar paquete

Tubos capilares heparinizados  Temporizador


Solo para uso profesional de diagnóstico in vitro.

 No lo use después de la fecha de vencimiento indicada en el paquete.No use la prueba si su bolsa de aluminio está

dañado.No reutilice las pruebas.

  Este kit contiene productos de origen animal.Conocimiento certificado del origen y/o sanitario

El estado de los animales no garantiza totalmente la ausencia de agentes patógenos transmisibles.Él  por lo tanto, se recomienda que estos productos sean tratados como potencialmente infecciosos y manipulados observando las precauciones habituales de seguridad (no ingerir ni inhalar).

  Evite la contaminación cruzada de las muestras utilizando un recipiente de recogida de muestras nuevo para cada

muestra obtenida.

Lea todo el procedimiento detenidamente antes de realizar cualquier prueba.

 No coma, beba ni fume en el área donde se manipulan las muestras y los kits.manejar todo

especímenes  como si contuvieran agentes infecciosos.Observe las precauciones establecidas contra los peligros microbiológicos durante todo el procedimiento y siga los procedimientos estándar para la eliminación adecuada de las muestras.Use ropa protectora como batas de laboratorio, guantes desechables y protección para los ojos cuando se analicen las muestras.

No intercambie ni mezcle reactivos de diferentes lotes.

La humedad y la temperatura pueden afectar negativamente los resultados.


RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS

1. La prueba rápida de filariasis IgG/IgM se puede realizar en sangre entera/suero/plasma.

2. Para recoger enteros  especímenes de sangre, suero o plasma siguiendo los procedimientos regulares del laboratorio clínico.

3. La prueba debe realizarse inmediatamente después de la recolección de la muestra.No deje las muestras a temperatura ambiente durante períodos prolongados.Para el almacenamiento a largo plazo, las muestras deben mantenerse por debajo de -20C.La sangre completa debe almacenarse a 2‐8C si la prueba se va a realizar dentro de los 2 días posteriores a la recolección.No congele las muestras de sangre completa.

4. Llevar las muestras a temperatura ambiente antes de la prueba.Las muestras congeladas deben descongelarse completamente y mezclarse bien antes de la prueba.Las muestras no deben congelarse y descongelarse repetidamente.


PROCEDIMIENTO DE ENSAYO

1. Lleve la muestra y los componentes de prueba a temperatura ambiente.Coloque el dispositivo de prueba en una superficie limpia y plana.

2. Llene el cuentagotas de la pipeta con la muestra.Aplique 1 gota de muestra (sangre completa, plasma o suero) en el pocillo de la muestra, luego agregue 1 gota (alrededor de 35 a 50 µL) de diluyente de muestra inmediatamente.Configurar temporizador.

3. Los resultados se pueden leer en 15 minutos.No lea el resultado después de 15 minutos.


INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO DEL ENSAYO

RESULTADO POSITIVO:

C

T1

T2

C

T1

T2


T1

T2

*NOTA: La intensidad del color en la(s) región(es) de la línea de prueba variará según la concentración de anticuerpos contra la filariasis en la muestra.Por lo tanto, cualquier matiz de color en la(s) región(es) de la línea de prueba debe considerarse positivo.

RESULTADO NEGATIVO:

C

T1

T2


INVÁLIDO

C

T1

T2

RESULTADO:

C

T1

T2

La línea de control no aparece.Un volumen de muestra insuficiente o técnicas de procedimiento incorrectas son las razones más probables de la falla de la línea de control.Revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo de prueba.Si el problema persiste, deje de usar el kit de prueba inmediatamente y comuníquese con su distribuidor local.


Usando casetes de prueba rápida de filariasis IgG/IgM individuales como se describe en el procedimiento de ensayo anterior, ejecute 1 control positivo  y 1 Control Negativo (proporcionado a pedido) bajo las siguientes circunstancias para monitorear el desempeño de la prueba:

1. Un nuevo operador usa el kit antes de realizar pruebas de muestras.

2.  Se utiliza un nuevo kit de prueba.

3.  Se utiliza un nuevo envío de kits.

4.  La temperatura utilizada durante el almacenamiento del kit está fuera de los 2°C‐30°C.

5. La temperatura del área de prueba cae fuera de 15°C‐30°C.


1. Rendimiento clínico para la prueba de IgM

Se analizaron 24 muestras de pacientes con filariasis linfática aguda y 200 muestras recolectadas de una región sin filariasis mediante la prueba rápida Filariasis IgG/IgM.

La comparación para todos los sujetos se muestra en la siguiente tabla:



Prueba rápida de filariasis IgG/IgM


Estado Clínico

Positivo

Negativo

Total

Filariasis aguda

23

1

24

Negativo

0

200

200

Total

23

201

224

Sensibilidad relativa: 95,8 %;Especificidad relativa: 100%;Acuerdo global: 99,6%

2. Rendimiento clínico para la prueba de IgG

Se analizaron 26 muestras de pacientes con filariasis linfática crónica y 200 muestras recolectadas de una región sin filariasis mediante la prueba rápida Filariasis IgG/IgM.La comparación para todos los sujetos se muestra en la siguiente tabla:



Prueba rápida de filariasis IgG/IgM


Estado Clínico

Positivo

Negativo

Total

Filariasis crónica

24

2

26

Negativo

0

200

200

Total

24

202

226

Sensibilidad relativa: 92,3%;Especificidad relativa: 100%;Acuerdo global: 99. 1%


1. El procedimiento de ensayo y la interpretación de los resultados de la prueba deben seguirse de cerca cuando se prueba la presencia de anticuerpos contra los parásitos filaria en suero, plasma o sangre total de sujetos individuales.El incumplimiento del procedimiento puede dar resultados inexactos.

2.  La prueba rápida de filariasis IgG/IgM se limita a la detección cualitativa de anticuerpos contra W. bancrofti y B. malayi en suero, plasma o sangre total humanos.La intensidad de la banda de prueba no tiene una correlación lineal con el título de anticuerpos en la muestra.

3. Un resultado negativo para un sujeto individual indica la ausencia de anticuerpos detectables contra W. bancrofti y B. malayi.Sin embargo, un resultado negativo de la prueba no excluye la posibilidad de exposición a W. bancrofti y B. malayi.

4. Puede producirse un resultado negativo si la cantidad de anticuerpos contra W. bancrofti y B. malayi presentes en la muestra está por debajo de los límites de detección del ensayo, o si los anticuerpos que se detectan no están presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se encuentra la muestra. se recoge

5. Algunas muestras que contienen títulos inusualmente altos de anticuerpos heterófilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados.

6. Los resultados obtenidos con esta prueba solo deben interpretarse junto con otros procedimientos de diagnóstico y hallazgos clínicos.


1. Filariasis linfática: la enfermedad y su control.Quinto informe del Comité de Expertos en Filariasis de la OMS.OMS Tech Rep Ser 1992;281-871.

2. Michael E, Bundy DAP, Grenfell BT.Reevaluación de la prevalencia y distribución mundial de la filariasis linfática.Parasitología 1996;112:405-428.

3. Eberhard ML, Lammie PJ.Diagnóstico de laboratorio de la filariasis.clin.Lab Med 1991;11:977-1010.

4. Más SJ, Copeman DB.Un ELISA basado en anticuerpos monoclonales altamente específico y sensible para la detección de antígeno circulante en la filariasis bancroftiana.Trop Med Parasitol 1990;41:403-406

5. Lammie  PJ, Weil G, et al: Ensayos de anticuerpos basados ​​en antígenos recombinantes para la vigilancia del diagnóstico de la filariasis linfática, un ensayo multicéntrico.Flaria Jornal 2004: 3: 9‐ 18.

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